Оптимизация методов молекулярно-генетической диагностики пациентов с распространенным немелкоклеточным раком легкого путем внедрения тестирования ROS1 в Республике Казахстан
Ключевые слова:
молекулярно-генетическая диагностика ROS1, метастатический немелкоклеточный рак легкого (мНМРЛ), иммуногистохимия (ИГХ), полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР), флуоресцентная гибридизация in situ (FISH), рак легкого (РЛ)Аннотация
Актуальность: В настоящее время молекулярная диагностика немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ) в Казахстане включает определение статуса драйверных мутаций EGFR, ALK и статуса PD-L1. Жизненно важная терапия для пациентов с положительным результатом на эту драйверную мутацию в настоящее время затруднена.
Цель исследования – оптимизация методов молекулярно-генетической диагностики пациентов с НМРЛ путем внедрения тестирования ROS1 в Республике Казахстан.
Методы: Исследовался биопсийный и операционный материал пациентов с НМРЛ, фиксированный в 10%-ном забуференном формалине. После первоначальной морфологической диагностики аденокарциномы, определения статуса мутаций EGFR и ALK образцы опухоли с отрицательным статусом EGFR и ALK отбирались для дальнейшего выявления статуса мутации ROS1. Определение статуса мутации ROS1 проводилось двумя методами: первый метод – иммуногистохимический анализ (ИГХ) на платформе Ventana BenchMark Ultra с использованием антитела ROS1 (SP283) и системы визуализации OptiView DAB Detection Kit. По результатам ИГХ образцы с положительными и сомнительными результатами направлялись на полимеразную цепную реакцию с обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР), чтобы подтвердить статус мутации ROS1 – второй метод.
Результаты: С 01.01.2022 по 30.09.2022 гг. всего методом ИГХ исследовано 99 образцов опухолей пациентов с EGFR отрицательной и ALK-отрицательной аденокарциномой легкого. Результаты ИГХ-окрашивания расценивали как: 0 (отрицательно) – 59 образцов, 1+ (отрицательно) – 25 образцов, 2+ (сомнительно) – 12 образцов, 3+ (положительно) – 3 образца. Случаи с ≥70% иммуноокрашивания считались положительными. Образцы с оценкой окрашивания ИГХ 2+ (сомнительно), 3+ (положительно) и несколько образцов 1+ были отправлены на подтверждение ПЦР-тестированием. Всего с помощью ОТ-ПЦР было протестировано 22 образца; результаты расценены следующим образом: 1 (4%) – положительный, 13 (59%) – отрицательный, 8 (37%) – невалидный.
Заключение: При определении статуса мутации ROS1 с помощью ИГХ было получено большое количество положительных и сомнительных результатов, а при последующем тестировании ОТ-ПЦР – большая доля невалидных результатов. В дальнейшем при выборе методики обнаружения ROS1 для проведения анализов на страновом уровне необходимо оценить экономическую затратную составляющую внедряемых методов, а также сравнить со стандартной валидированной
методикой FISH.
